该成果通过三种脱毒技术, 温度处理结合茎尖培养脱除病原MLO, 微茎尖
培养脱除泡桐丛枝病原MLO, 60Co照射处理病组培苗的研究, 得出在35oC处理
一个月后截取茎尖组培脱毒技术, 既可保证无病, 又能保持泡桐原来的优良特性,
同时易于人工快繁和工厂化育苗。单纯的微茎尖培养脱毒效率低, 而60Co照射
无脱毒效果。
研制出的抗血清制剂用于间接免疫荧光显微技术检测泡桐丛枝病原(MLO)
的效果高于用DAPI荧光显微检测。用PCR扩增16S rDNA检测泡桐丛枝病类菌
原体达9.4pgDNA含量水平。可以检测出组培病苗鲜材料稀释的106-107倍的DNA
提取液。以上两种灵敏度高、特异性强的检测方法, 不仅确保了脱毒研究的科学
性和脱毒苗的可靠性, 而且为我国泡桐丛枝病苗期带毒诊断和林木检疫提供了新
的技术。该研究成果达到了国内同类研究的领先水平。在应用PCR技术检测泡
桐丛枝病原MLO方面达到了国际先进水平。
关键技术和创新点: ⑴以泡桐组培苗为试材进行温度处理结合茎尖培养的方
法未见报道, 脱毒效率100%, 室内脱毒5年的泡桐组培苗长成的幼树未见复发。
同时首次进行了133.3hm2无毒苗的造林试验获得成功。⑵试验确定了处理泡桐
丛枝病组培苗脱毒的合适温度、时间, 解决了切取的茎尖长度等关键脱毒技术,
避免了单一温度或四环素处理种根、种苗后育苗或定植不可避免的丛枝病复发的
现象, 从而保证了此技术的易于操作和脱毒彻底。⑶以染病组培苗为病原MLO的
提纯材料制备的抗血清效价提高, 特异性增强, 并采用间接免疫荧光显微镜技术
检测泡桐丛枝病为世界首次报道。⑷应用PCR技术检测泡桐丛枝病原(MLO)达
到国际先进水平。⑸提出了优选-植物组培-病原检测-移植过渡-建立无毒苗繁育
基地-造林等一整套无毒苗生产程序。
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