国家级奖成果
欧洲黑杨抗虫转基因的研究
时间:2019-12-13 来源: 文字: 图片: 编辑:lky 点击:
主要完成人员:田颖川 韩一凡 莽克强 王学聘 李太元 戴莲韵 李 玲 卢孟柱 韩一浓
主要完成单位:中国林科院林业所 中国科学院微生物研究所
项目起止时间:1990年~1992年
获  奖  情  况 :1994年林业部科技进步二等奖 1998年国家科技进步三等奖

  该成果采用树木基因工程原理,以欧洲黑杨的叶片和茎为外植体,用带有35S—Ω—Bt—NOS嵌合基因的双源载体的农杆菌进行转化,获得了54株转化再生植株,根据植株对杨尺蠖的毒力测定结果和苗期生长量,采用重心聚类法分析,选出了生长良好杀虫效果明显的3个植株192,12和153。并经对舞毒蛾和杨尺蠖重复毒力测定,结果表明,8天内校正死亡率高达100%,存活下来的昆虫其生长和发育也受到明显抑制。上述植株PCR及PCR产物的Sothern Bloting 和再生植株DNA Southern Bloting的测定结果均呈阳性反应,进一步证明Bt基因插入到这些植株染色体上,并得到充分表达。该成果为林木基因工程研究和抗虫转基因杨树的应用奠定了基础。在林木抗虫基因工程研究方面填补了国内空白,达到了国际同类研究先进水平。

  关键技术:(1)拥有欧洲黑杨叶片高频率不定芽分化系统,其诱导率为100%,每叶片可分化出10-20个不定芽,在分化培养基上培养20天后便开始出现不定芽;(2)拥有在杨树中能够高表达的Ω片段CDNA增强翻译的Bt基因;(3)拥有一套成熟的组培苗木培育技术,保证了转化植株能够移栽到大田;(4)拥有人工饲养昆虫的技术,能及时对转化植株进行素养力筛选;(5)拥有一整套熟练地PCR,南方印迹法和北方印迹法检测手段,将转基因植株迅速筛选出来。

  创新点:(1)在构建启动子时增加Ω片段,以增强基因表达能力;(2)林木转基因植株具有高表达能力,杀虫率可达100%,国内外属首次;(3)及时将转基因植株进入大田测定,不同于国外仅停留于实验室阶段,该转基因植株已在食叶害虫发生区—新疆玛纳斯林场进行繁殖和营建测试林,进行了天然抗虫性测定。

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